簡述革蘭氏染色的原理

簡述革蘭氏染色的原理

革蘭氏染色法，是將所有細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陰性菌（G-）和革蘭氏陽性菌（G+）兩大類，是細(xì)菌學(xué)中最為常用的鑒別染色法。這種染色的方法能夠?qū)⒓?xì)菌分為陰性和陽性，主要認(rèn)為革蘭氏顏色染色是基于細(xì)菌細(xì)胞壁特殊化學(xué)組分進(jìn)行染色的。

染色原理，主要是通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)菌細(xì)胞壁內(nèi)形了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，隨后再用95%的乙醇進(jìn)行脫色即可。

革蘭氏染色法，是指細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法，這種染色法是由丹麥的醫(yī)生革蘭氏于1884年所發(fā)明的，最初其是用來鑒別肺炎球菌與克雷伯肺炎菌。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色及復(fù)染等四個(gè)步驟。未經(jīng)過染色的細(xì)菌，由于其周圍的環(huán)境折光率差別較小，故在顯微鏡下難以進(jìn)行區(qū)分。但是，只要經(jīng)過染色后，陽性菌會(huì)呈現(xiàn)出紫色，陰性菌呈現(xiàn)的則是紅色，并且還能夠清楚的看到細(xì)菌的形態(tài)，排列及其某些結(jié)構(gòu)的特征，從而可以輕松地進(jìn)行分類鑒定。

革蘭染色的原理

革蘭氏染色原理是細(xì)菌對于革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。
革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要是由膚聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的，在染色過程中，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞內(nèi)而不易脫色，因此，呈現(xiàn)藍(lán)紫色。

革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁中膚聚糖含量低，而脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，脂類物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復(fù)染液（番紅）的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。

革蘭氏染色的步驟
細(xì)菌經(jīng)過堿性燃料結(jié)晶紫染色，后經(jīng)過碘液進(jìn)行媒染，然后用酒精脫色，在一定的條件下，有的細(xì)菌媒染后，顏色不被脫去，有的會(huì)被脫去，因此會(huì)把細(xì)菌分成兩類，不被脫去的被稱為革蘭氏陽性菌，脫去的則被稱之為革蘭氏陰性菌。
脫色后可以在用紅色染料進(jìn)行復(fù)染，陽性菌是紫色，陰性菌則被重新染上了紅色。很多有芽孢的桿菌和大部分的球菌，還有放射菌以及真菌杜輝呈現(xiàn)革蘭氏正反應(yīng)，而弧菌、螺旋體以及大多數(shù)的致病性無芽孢桿菌則呈現(xiàn)出副反應(yīng)。

革蘭氏染色法的原理是什么

革蘭氏染色法的原理是細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性屏障當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔隙縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上，呈紫色。肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高，乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，番紅染液復(fù)染后呈紅色。

革蘭氏染色法的原理

革蘭染色法是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立，直到現(xiàn)今，革蘭氏染色法仍是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，而后經(jīng)碘液進(jìn)行媒染，之后用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌媒染后的顏色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G-)。

為方便進(jìn)一步觀察，脫色后可再用一種紅色染料如堿性番紅等進(jìn)行復(fù)染。

陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被重新染上紅色。有芽孢的桿菌和絕大多數(shù)的球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng);弧菌、螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽孢桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣?，F(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的**白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。

另外，陽性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同pH條件下進(jìn)行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時(shí)的染色液pH和染色時(shí)間等條件要嚴(yán)格控制。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng); pH很低時(shí)，則都可呈負(fù)反應(yīng)。

此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對結(jié)晶紫-碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時(shí)間、脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是： (一)涂片固定在干凈的載玻片**滴加一滴蒸餾水，用接種環(huán)進(jìn)行無菌操作，挑取培養(yǎng)物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成菌懸液并涂布成直徑約1cm的薄層。

為避免因菌數(shù)過多聚集成團(tuán)，不利于觀察細(xì)菌個(gè)體形態(tài)，可在載玻片一側(cè)進(jìn)行上述操作，而在另一側(cè)再加一滴水，從已涂布的菌液中再取一環(huán)于此水滴中進(jìn)行稀釋，涂布成薄層。若材料為液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物中洗下制備的菌液，則直接涂布于載玻片上即可，如菌液濃度較大，也可使用水滴再進(jìn)行一次稀釋。涂片**在室溫條件下使其自然干燥，有時(shí)為了使之干得更快些，可將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈火焰上方較高的位置微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過長，以防標(biāo)本烤枯而變形。

標(biāo)本干燥后即進(jìn)行固定，固定的目的有三個(gè)：(1)殺*微生物，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。(2)保證菌體能更牢固的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本水洗時(shí)被水沖洗掉。(3)改變?nèi)玖蠈?xì)胞的通透性，因?yàn)?的原生質(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。固定常常利用高溫，手執(zhí)載玻片的一端(涂有標(biāo)本的遠(yuǎn)端),標(biāo)本向上，在酒精燈火焰外層盡快的百科來回通過3-4次，共約2s-3s,并不時(shí)以載玻片背面加熱，載玻片背面觸皮膚，以不覺過燙為宜(不超過60℃),待放置冷后，再進(jìn)行染色。

（二)染色在固定過的涂片菌膜上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染色液應(yīng)完全覆蓋整個(gè)菌膜，染色1min。(三)水洗染色到一定的時(shí)間，拿住玻片使之成450角，用細(xì)小的水流把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。(四)媒染加碘液覆蓋涂面染1 min。在媒染處理時(shí)，媒染劑與染料形成不溶性的化合物，可增加染料和細(xì)菌的親和力。

(五)水洗，用吸水紙吸去水分用細(xì)小的水流緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。(六)脫色加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色， 20 s~30 s后再進(jìn)行水洗，吸去水分。(七)復(fù)染蕃紅染色液染色10 s后， 自來水沖洗。(八)干燥，鏡檢染色的結(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。

革蘭染色法的原理是什么

早在十九世紀(jì)丹麥的醫(yī)生就創(chuàng)立了革蘭染色法，到現(xiàn)在為止，革蘭染色法廣泛被用來做鑒別的一種染色方法。那么革蘭氏染色法的基本原理是什么呢?
細(xì)菌經(jīng)過堿性燃料結(jié)晶紫染色，后經(jīng)過碘液進(jìn)行媒染，然后用酒精脫色，在一定的條件下，有的細(xì)菌媒染后，顏色不被脫去，有的會(huì)被脫去，因此會(huì)把細(xì)菌分成兩類，不被脫去的被稱為革蘭氏陽性菌，脫去的則被稱之為革蘭氏陰性菌。

脫色后可以在用紅色染料進(jìn)行復(fù)染，陽性菌是紫色，陰性菌則被重新染上了紅色。

很多有芽孢的桿菌和大部分的球菌，還有放射菌以及真菌杜輝呈現(xiàn)革蘭氏正反應(yīng)，而弧菌、螺旋體以及大多數(shù)的致病性無芽孢桿菌則呈現(xiàn)出副反應(yīng)。革蘭氏染色法的原理是革蘭氏陽性菌和陰性菌在化學(xué)和生理性質(zhì)上差別比較大，染色體的反應(yīng)也不一樣，一般陽性菌和碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合比較牢固，不容易脫色，而陰性菌的結(jié)合相對比較弱，容易脫色，這是導(dǎo)致染色反應(yīng)的主要依據(jù)。

革蘭氏染色的原理是什么?他是怎么把革蘭氏陽性菌和陰性均染成不同顏色 的?

革蘭氏染色原理是通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌在遇脫色劑后，呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。其中，染色的差異主要是陰性與陽性細(xì)菌細(xì)胞壁的差異所引起的。