高效液相色譜常用哪些檢測(cè)器

高效液相色譜常用哪些檢測(cè)器

最常用的檢測(cè)器是紫外吸收檢測(cè)器（UVD），用于有紫外吸收的物質(zhì)。其他的二極管陣列檢測(cè)器（DAD）可以掃描出一個(gè)3D光譜，它是在紫外檢測(cè)器基礎(chǔ)上改良出來(lái)的，用于多波長(zhǎng)錯(cuò)組分物質(zhì);示差折光檢測(cè)器（RID）和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）都屬于**檢測(cè)器，可以檢出沒(méi)有紫外吸收的物質(zhì)。

還有熒光檢測(cè)器，用于可發(fā)出熒光的物質(zhì)。

擴(kuò)展資料：
高效液相色譜法（High Performance Liquid?Chromatography?\\ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。
高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。
該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。
高效液相色譜適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛應(yīng)用于核酸、肽類、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、*物、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲(chóng)劑、除莠劑的分析等物質(zhì)的分析。

常見(jiàn)的液相色譜柱檢測(cè)器是哪幾種？

光學(xué)類檢測(cè)器

1、紫外吸收檢測(cè)器（UVD）是目前HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器。它的主要特點(diǎn)是靈敏度高，線性范圍寬，對(duì)流速和溫度變化不敏感，可用于梯度洗脫。

它要求被檢測(cè)樣品組分有紫外吸收，屬于選擇性檢測(cè)器。

2、二極管陣列檢測(cè)器（PDAD）是20世紀(jì)80年代才出現(xiàn)的一種光學(xué)多通道檢測(cè)器，它可以看作是UVD的一個(gè)分支。在對(duì)每個(gè)洗脫組分進(jìn)行光譜掃描，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理后，得到光譜和色譜結(jié)合的三維圖譜。其中吸收光譜用于定性（確證是否是單一純物質(zhì)），色譜用于定量，常用于復(fù)雜樣品（如生物樣品、中草*）的定性定量分析。

3、熒光檢測(cè)器（FLD）同樣屬于選擇性檢測(cè)器，其靈敏度在目前常用的HPLC檢測(cè)器中是**的，應(yīng)用也較多，僅次于UVD。

它適用于能激發(fā)熒光的化合物。很多與生命科學(xué)有關(guān)的物質(zhì)，如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝*物都可以用熒光法檢測(cè)。熒光檢測(cè)器在生物樣品痕量分析中很有用，尤其在用熒光衍生后，可以檢測(cè)很微量的氨基酸和肽。

通用型檢測(cè)器

1、示差折光檢測(cè)器（RID）是一種通用型檢測(cè)器，只要被測(cè)組分與洗脫液的折光指數(shù)有差別就可使用。生命科學(xué)中常遇到各類糖類化合物，沒(méi)有紫外吸收，一般常用示差折光檢測(cè)器。它的通用性比UVD廣，但靈敏度要低，對(duì)溫度變化敏感，并與梯度洗脫不相容，因而限制了它的使用。

2、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）也是一種通用型的檢測(cè)器，可檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品，而不需要樣品含有發(fā)色基團(tuán)。ELSD的響應(yīng)值與樣品的質(zhì)量成正比，因而能用于測(cè)定樣品的純度或者檢測(cè)未知物。ELSD靈敏度比RID高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，可用于梯度洗脫。

現(xiàn)在ELSD已被廣泛應(yīng)用于碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、*物以及聚合物等的檢測(cè)。

3、質(zhì)譜檢測(cè)器（MSD）是另一種通用型檢測(cè)器，在靈敏度、選擇性、通用性及化合物的分子量和結(jié)構(gòu)信息的提供等方面都有突出的優(yōu)點(diǎn)。但它的昂貴操作費(fèi)用和復(fù)雜性限制了它的推廣應(yīng)用。

高效液相色譜儀的常用檢測(cè)器有哪幾種，有什么區(qū)別嗎？

檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。
PDA檢測(cè)器：即紫外檢測(cè)器，點(diǎn)時(shí)間可檢測(cè)單一點(diǎn)處吸收值。

DAD檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，可理解為無(wú)數(shù)個(gè)PDA檢測(cè)器串聯(lián)。

即點(diǎn)時(shí)間可檢測(cè)某一波段吸收值，比PDA檢測(cè)器定性能力強(qiáng)大。
熒光檢測(cè)器：對(duì)某些吸收紫外光后可發(fā)射熒光的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度較高。
蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：可以檢測(cè)沒(méi)有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì)（不可用于梯度洗脫）
示差折光檢測(cè)器：根據(jù)折射率的變化對(duì)樣品濃度檢測(cè)（不可用于梯度洗脫），**檢測(cè)器，但是定性能力和PDA一樣差。

1.紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器(ultraviolet－visibledetector，UVD)

紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器(UVD)是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。

其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見(jiàn)光度計(jì)。
(1)紫外吸收檢測(cè)器
紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見(jiàn)區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng)，并安裝一個(gè)光柵型單色器，其波長(zhǎng)選擇范圍寬(190nm～800nm)。

它有兩個(gè)流通池，一個(gè)作參比，一個(gè)作測(cè)量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過(guò)純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無(wú)吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無(wú)信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號(hào)輸出，輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān)。
局限：流動(dòng)相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動(dòng)相，每種溶劑都有截止波長(zhǎng)，當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過(guò)溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)。

(2)光電二極管陣列檢測(cè)器(photodiodearraydetector，PDAD)
也稱快速掃描紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)器，是一種新型的光吸收式檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時(shí)檢測(cè)由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長(zhǎng)的光信號(hào)，然后對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速?zèng)Q定具有**選擇性和靈敏度的波長(zhǎng)。

單光束二極管陣列檢測(cè)器，光源發(fā)出的光先通過(guò)檢測(cè)池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)學(xué)的方法快速掃描提取出來(lái)，每幅圖象僅需要10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。
2．熒光檢測(cè)器(fluorescencedetector，F(xiàn)D)

熒光檢測(cè)器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器，可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過(guò)化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測(cè)。

其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng／ml，適用于痕量分析;一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。近年來(lái)，采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。
3.示差折光檢測(cè)器(differentialrefractiveIndexdetector，RID)
示差折光檢測(cè)器是一種濃度型通用檢測(cè)器，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來(lái)測(cè)定樣品含量的。

光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè)，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。

4.電化學(xué)檢測(cè)器(elec)chemicaldetector，ED)

電化學(xué)檢測(cè)器主要有安培、極譜、庫(kù)侖、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器，屬選擇性檢測(cè)器，可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無(wú)機(jī)和有機(jī)陰陽(yáng)離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)*及醫(yī)*等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。

其中，電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用最多。
電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是：
①靈敏度高，最小檢測(cè)量～般為ng級(jí)，有目可達(dá)pg級(jí);
②選擇性好，可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì);
③線性范圍寬，一般為4～5個(gè)數(shù)量級(jí);
④設(shè)備簡(jiǎn)單，成本較低;
⑤易于自動(dòng)操作。
5.化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(c。

iluminescencedetector，CD)

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。

當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g。

高效液相色譜儀推薦

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